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成果名称：HLA基因分型芯片检测系统
申请单位：清华大学
鉴定编号：鉴字[教TP2005]第023号
鉴定日期：2005年8月29日
学 科：医药卫生
成果简介：
HLA（Human Leucocyte Antigen）即人类白细胞抗原，也被称为人类主要组织相容性抗原，是由人类6号染色体短臂上200多个基因组成的基因复合体（major histocompatibility complex, MHC）编码的一组能广泛参与人体免疫应答反应的抗原。HLA分型在骨髓干细胞库的建立、疾病易感性机理研究、组织器官移植等方面具有重大应用价值。
HLA-A，B，DRB1是HLA基因复合体中功能最重要的三个基因位点，也是骨髓干细胞库入库分型要求检测的三个基因位点。博奥HLA分型芯片就是针对骨髓库入库分型而设计的一种中低分辨率的高通量基因分型芯片，可以同时报告三个位点的基因型和血清型。通过上千份样品的盲测试验证明该芯片系统的分型准确率达99.8%以上，是目前已知技术中最高的。而且，其每张芯片最多可以对上万份样品进行分析，是目前通量最高的分型方法。该芯片除了可用于骨髓库入库分型外，也可以用于HLA科研领域。
HLA基因分型芯片检测技术建立了以氨基基片为片基、以不对称PCR为样品制备方法、以TAMRA标记的Oligo为检测探针的正向杂交型HLA基因分型检测方法。通过探针设计的改进、杂交条件的优化，选出了覆盖HLA_A/B/DRB1三个基因位点上多数SNP位点的一套探针，并确定了其最适杂交反应条件；同时开发了用于计算机分型的HLA分型软件，从而成功地构建了HLA基因的中分辨率分型芯片。采用正向杂交的方法，以基因组DNA为模板，分别对待测样品的HLA_A/B/DRB1三个基因的目的片段进行扩增。将每个样品三个基因的扩增产物分别点在芯片上，制成针对HLA_A/B/DRB1三个基因位点的DNA芯片。用三组分别针对三个基因的荧光标记的HLA型特异性探针分别与芯片进行杂交，用HLA分型软件对每个样品的杂交结果进行分析，从而确定每个样品的HLA_A/B/DRB1基因型。良好的片基，独特的样品制备技术、独特的探针设计、点阵设计、长期积累的杂交经验、专利化盖片设计、自主研发的分析软件，是此技术的基础；其强大的方法学优势和全方位质量控制是快速、准确分型的有力保证。利用此技术一次性可同时检测大量样品，实现高通量检测，每张芯片可印制数百至数千份样品，真正体现了芯片的技术优势。
HLA基因分型芯片检测技术开发了具有强大功能和高度自动化的程序和软件。杂交结果阴阳性判断程序可以同时完成A、B、DRB1三个区的杂交结果判读工作。程序运行结束后会生成杂交阴阳性判读的结果文件，利用此文件所包括的信息，分型软件便可以给出最终的分型结果。通过该程序和软件可进行高通量的HLA分型，每批的分型样品数量可高达数千份，在无需试验人员主观干预的情况下实现，从而使判型过程快速、简便，判型结果客观、准确。
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