成果名称：枯草芽孢杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶在毕赤酵母中的高效分泌表达研究
申请单位：中国农业大学农业部饲料工业中心
成果编号：鉴字[教NF2007] 第017号
鉴定日期：2007年11月27日
学科：动物营养与饲料加工
第一完成单位：中国农业大学
第一完成人：李德发
通讯地址及邮编：北京市海淀区圆明园西路2号
电话、传真：010-62733585； 010-62733688（fax）
成果内容摘要：
采用PCR技术，克隆了枯草芽孢杆菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶的编码基因。序列分析表明，该基因编码一24.1 kD的成熟蛋白，GenBank登录号：EU082110。根据毕赤酵母密码子的偏好性对该β-1,3-1,4-葡聚糖酶的编码基因进行了密码子优化设计和从头全新合成，构建了毕赤酵母表达载体，电击转化，抗生素筛选，获得了高效表达外源基因的重组工程菌株。利用10 L全自动发酵罐对重组菌株进行了高密度发酵研究，在甲醇的诱导下，实现了该β-1,3-1,4-葡聚糖酶在毕赤酵母中的高效分泌表达。该菌株在10 L发酵罐中高密度发酵培养，在甲醇的诱导下，每mL发酵液产酶蛋白5mg,在最适条件下，发酵液的β-1,3-1,4-葡聚糖酶活性为15,000 U/mL。酶学性质分析表明，该葡聚糖酶最适催化温度为40℃，接近动物的体内温度。酶的最适催化pH值为6.4。该酶在弱酸性到中性条件下都有较高的催化活性，且对多种金属离子及化学因子有较好的耐受性，适合用于猪、鸡等单胃动物的饲料添加剂使用。
